平台介绍

缔码生物依托武汉生物技术研究院实验平台，拥有高速细胞分选仪、分析型流式细胞仪、3D活细胞共聚焦系统、荧光倒置显微镜、全功能微孔板分析仪等仪器设备，可满足相关肿瘤靶点抗体分子药效功能评价的各种实验需求。同时，缔码生物针对肿瘤靶点抗体分子，建立了一整套完善的体外评价体系。

系统的体外功能分析

缔码生物从肿瘤靶点抗体分子的临床应用出发，建立了系统的体外功能分析测试平台，包括细胞增殖抑制测试、细胞毒性测试、CDC测试、ADCC测试、ADCP测试、炎症因子测试等，全方位的评价候选肿瘤靶点抗体分子的功能，助力药企客户候选抗体分子的发现和应用。

表1.体外功能分析检测项目

部分体外功能测试介绍

1.基于流式的细胞结合力分析

对于早期筛选的多个抗体分子，通过分析这些抗体分子和其靶点在天然细胞上的结合力，以便客户进行评估分级，决定最佳抗体分子。图1展示了利用流式测试抗体分子的结合力。

2. 阻断活性分析

如果希望开发阻断天然配体和受体相互作用而达到治疗效果的抗体分子，我们会在筛选阶段将相应的配体受体阻断实验设计进去，能够快速的获得具有阻断功能的抗体分子。图2展示了SIRPα抗体分子阻断CD47蛋白与THP-1细胞上SIRPα蛋白的结合，其阻断活性IC50为30.88ng/ml。

3.生物发光检测系统

利用萤火虫荧光素酶报告基因系统(Luciferase Based reporter Gene System)特异性标记的靶点肿瘤细胞，不仅可用于体外免疫细胞杀伤评价，还可以直接用于活体动物水平的肿瘤免疫模型评价。我们利用多发性骨髓瘤细胞系NCI-H929构建的荧光素酶报告基因系统，测试了BCMA双特异性抗体（DM2克隆）的体外杀伤效果，见图3。

4. 补体依赖的细胞毒性(CDC)测试

诸如CD20单抗、CD52单抗等抗体分子与靶细胞表面的分子结合后，可以介导补体C1q结合到抗体的Fc部分，并与肿瘤细胞膜上形成类似于穿孔素效应的攻膜复合体（MAC)，造成细胞外离子大量内流，最终导致肿瘤细胞的溶解（如图4示意图）。

5. 抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCC)测试

抗体通过与靶细胞表面抗原特异性结合，招募如NK细胞等效应细胞杀死靶细胞。NK细胞表面表达FcγRIIIa蛋白，是一种抗体Fc区域的受体，能识别并结合抗体的Fc端，从而使NK细胞结合到靶细胞周围。一旦Fc受体与抗体的Fc区域结合，在NK细胞中Fc受体(FcR)活化，尤其是FcRγIIIa受体(CD16)活化能够引起NFAT(nuclear factor of activated T-cells)信号通路的激活，NK细胞就会释放细胞因子和细胞毒性颗粒，进入靶细胞触发细胞凋亡（如图5示意图）。

6. CAR T-细胞构建及功能测试

抗体制备平台的一个突出的优势是我们可以快速获得抗体的基因序列，对于诸如CAR T-细胞的应用，可以在早期先导分子筛选阶段就将抗体的scFv序列构建到CAR结构中，通过测试CAR T-细胞的肿瘤杀伤能力，让客户在抗体早期功能筛选时做出判断，图6展示我们CAR T-细胞测试的流程。