1. Q: 冻干产品如何复溶？复溶体积如何计算，是否一定要按照冻干前浓度来计算复溶体积?

       A: 随货COA上有冻干前的产品浓度和推荐稀释体积；过低或者过高的溶剂浓度都可能会影响蛋白的稳定性；您拿到产品使用前，务必离心后加无菌水重悬。我们的蛋白质在1X PBS中冻干，pH值为7.4，通常含有5% – 8%的海藻糖作为保护剂。我们建议根据产品冻干前的浓度复溶，使用更大体积的水可能会导致溶液中的盐浓度降低，虽然这通常是可以的，但我们建议根据您的具体实验要求来确定。

2. Q: 关于产品功能的验证，哪些分析是可用的?

       A: 目前我们部分产品做的验证只有ELISA或流式细胞术检测，其他活动分析数据目前可能无法获得，请参考我们网站上的验证数据图表以获取最新信息。

3. Q: 不同批次的DIMA产品的稳定性如何?

       A: 针对蛋白和抗体产品，缔码内部开发了高效稳转株开发流程，极大缩小了产品生产批件差，并且缔码严格质量管理体系可以保证产品质量；您可以放心使用，使用中遇到任何问题，都可以随时联系我们。

1. Q: 我们产品的内毒素含量是多少?

       A: Dima产品生产的环境严格控制内毒素引入，我们的大多数蛋白质和抗体都是用HEK293细胞(一种人类细胞表达系统)产生的，而不是用大肠杆菌系统或其他天然资源。大多数内毒素问题都与大肠杆菌制备的蛋白质有关。因此，常规内毒素检测不是我们标准程序的一部分。然而，我们可以向您保证，我们的蛋白质的内毒素水平低于2 EU/μg (LAL)。

1. Q: 为什么冻干产品的运输温度为室温?

       A: 实验数据证明了DIMA冻干产品在环境温度下的优异稳定性。国内快递运输2-3天的运输周期不会对产品活动产生不利影响。

2. Q: 海藻糖在冻干产品中的浓度是多少?它会影响它们的功能吗?

       A: 在冻干前，我们的产品添加了5%~8%质量/体积的海藻糖溶液，以确保冻干过程中的稳定性。冻干后，我们通过SDS-PAGE等方法验证稳定性，并通过ELISA或FACS Binding等检测验证功能性。您可以放心使用我们的产品。

3. Q: Procline 300可以加到缓冲液中吗?

       A: 一般冻干产品不含Procline 300，添加后不适合冻干过程。Procline 300是一种防腐剂，但其毒性使其不适合用于冻干产品。如果您喜欢液体形式的产品，我们可以添加0.1% Procline 300。对于定制缓冲器，服务费将根据与目录价格的偏差单独计算。目前我们的产品全部为冻干产品，不含叠氮化钠、硫柳汞、2-巯基乙醇;它们只有5% – 8%的海藻糖。

1. Q: 你能把蛋白质的氨基酸序列发给我们吗?

       A: 我们的蛋白质的氨基酸序列可根据要求提供。请随时与我们联系，我们将及时提供所需的信息。

2. Q: 你们提供蛋白质生产的定制服务吗?

       A: 是的，我们可以根据您的具体需求提供定制的蛋白质生产服务。我们将根据您的序列要求与您合作设计项目。如果您对定制项目感兴趣，请告诉我们，我们可以提供有关定价和时间表的详细信息。我们的专业团队确保提供高质量的蛋白质，满足您的研究要求。如有任何其他问题或帮助，请随时与我们联系。

1. Q: 你能告诉我用于测定抗体浓度的消光系数吗?

      A: 由于抗体的复杂性较高，我们通常使用机器默认的消光系数用于测定，我们的全长抗体(HC+LC)的消光系数为0.735，浓度计算公式为A280/0.735。一般来说，预测消光系数与UV和Bradford测定的浓度一致，我们已经验证了这种一致性。

2. Q: 你能提供更多关于你网站上提到的抗体同型的信息吗?为什么你的抗体来自兔(宿主品种:兔)，但抗体同型:兔/人Fc嵌合IgG1?

      A: 这种抗体是嵌合形式的。最初是在兔子身上开发的，然后我们去掉了兔抗的Fc结构域，用人抗的IgG1 Fc取而代之。因此，它被称为嵌合抗体，其中Fab部分来自兔源，Fc部分来自人源。这种创新的设计结合了兔抗生产的优势和人抗Fc区的兼容性。对于二抗的使用，我们推荐山羊抗人HRP或其他缀合物。

3. Q: 你们的抗-DXD抗体会结合exatecan mesylate吗？

     A: 我们的抗-DXD抗体最初是使用DXD载体毒素开发的，Exatecan Mesylate与DXD密切相关，但并不完全相同，它们之间存在结构差异，我们的抗-DXD抗体不会结合exatecan mesylate。

1. Q: Nanodisc蛋白使用哪些材料合成?

       A: 我们使用在公司内部合成的合成纳米圆盘。然而，关于我们纳米圆盘组成的具体细节是专有和保密的.

2. Q: 是否可以购买空的纳米圆盘?

       A: 目前，我们没有空的纳米片可供购买。但是我们可以提供为特定靶蛋白设计的纳米盘。

3. Q: 在冻干和溶解后是否检测了蛋白质/纳米圆盘的功能?

       A: 我们所有的Nanodisc蛋白都经过了全面的冻干和测试程序。我们网站上的数据来自于冻干和复溶过程后的蛋白质。

4. Q: 你们为标准的Nanodisc蛋白产品提供额外的测试吗?

       A: 我们的Nanodisc蛋白已经用抗FLAG标签抗体进行了验证。如果有合适的抗体，我们可以尝试使用其他抗体进行验证。但是对于某些产品，我们的库存中可能没有合适的抗体。如果您有任何建议，请与我们分享，以便我们可以探索使用推荐抗体的可能性。

5. Q: 你们提供定制的Nanodisc开发吗?

       A: 我们可以为超出我们目前范围的目标提供定制的Nanodisc开发。为了提供准确的成本计算和时间表，我们需要关于项目目标和规模的具体细节。请分享您的具体要求，以便我们提供准确的估计和时间表。

对于新的靶点，我们通常使用表达cDNA克隆进行测试运行(80mL培养体积)。从测试运行中获得的蛋白质，从ng到100ug不等，将被发送给客户。实际成本和时间取决于具体的项目要求。例如，与具有4个跨膜结构域的蛋白质(如CLDN2)相比，具有12个跨膜结构域的蛋白质(如MDR1 (Human MDR-1全长蛋白-synthetic nanodisc- DIMA Biotechnology))在测试中会产生更高的成本。

此外，定制项目的任何其他考虑因素，例如独特的规格或特殊的处理说明，都可以根据项目细节进行讨论。如果客户没有提供表达cDNA克隆，我们将单独收费，这种情况下我们将把DNA克隆寄给客户。

6. Q: Nanodisc样品中有多个条带.

       A: 我们正在积极优化我们的条件，以获得更好的蛋白质效果。然而，根据我们的经验，由于磷酸化和糖基化等翻译后修饰(PTMs)，蛋白质可以表现出较高分子量的条带，或者由于细胞过程或样品制备过程中的切割而表现出较低分子量的条带。因此，我们建议查阅文献，看看是否报道了该特定蛋白的多个条带。如果您遇到任何关于该蛋白的参考数据，请随时与我们分享，以便我们进一步优化。

7. Q: VLP或MNP，Nanodisc一般80ml可以获得多少蛋白？

       A: VLP要看靶点，有一些靶点VLP表达不太好，正常表达的差不多在1mg左右；MNP通常都有在2-3mg左右；Nanodisc产量较低，大概在μg级别，所以相对来说成本较高，但是蛋白纯度也相对较高，是具有天然构象的纯化目标蛋白。

8. Q: Nanodisc蛋白质和相应的脂质和聚合物的总量是多少？你们用的蛋白质测量方法是什么？

    A: 对于Nanodisc蛋白的测量，我们使用标准的BCA定量方法进行测定。试管上显示的量是不包括脂质和合成聚合物在内的目标蛋白量。合成纳米盘上的脂质和聚合物的分子量平均在146kDa左右。因此，这两种组分的量可以用以下公式计算：脂质+合成聚合物=蛋白质X的量（146/目标蛋白的分子量）。

9. Q: 空纳米盘的共聚物复合物的分子量是多少？

     A: 平均分子量约为146kDa。详细的计算可参考文献（Hall SCL.，et al. 2018）。

10. Q: 您的客户是否在展示实验中使用了nanodisc膜蛋白?您推荐哪种固定方法?根据Dima Biotech的网站，nanodisc膜蛋白已经在SPR和ELISA应用中进行了测试——在这些应用中，你们是如何固定的?

        A: 关于固定，我们通常使用标准的ELISA包被方法，效果很好。我们也尝试过夹心法，即先包被抗FLAG抗体，然后再加入纳米盘蛋白。这两种方法都很有效。然而，有几个案例中，某些nanodisc蛋白在使用构象表位抗体时可能不适用于直接包被法。对于像anti-FLAG这样的线性表位，无论是直接包被法还是间接夹心法，都能有效地发挥作用。

11. Q: 你们提供生物素化的nanodisc膜蛋白吗?

        A: 目前我们不提供标准产品形式的蛋白。不过，我们已经开发了相关技术平台，可以为您提供定制服务。

12. Q: 请提供有关你们基于聚合物的nanodisc的稳定性、储存条件和缓冲液兼容性的更多信息。例如，它们是否兼容含有表面活性剂的缓冲液，如Tween-20，或者低浓度有机溶剂，如DMSO或乙醇？在使用基于聚合物的nanodisc膜蛋白开发检测时，还有其他限制吗？

        A: 我们的共聚物是基于SMA的技术，洗涤剂可能会影响nanodisc。然而，在ELISA实验中，我们使用了低浓度的Tween-20缓冲液，效果还不错。关于反应缓冲液的pH值，我们建议不低于pH5.0，因为SMA共聚物对低pH条件敏感。高浓度的二价阳离子也会影响基于SMA的共聚物，我们建议不使用超过5mM的二价阳离子浓度。我们尚未测试在DMSO或乙醇中的实验条件。

13. Q: Nanodisc的纯度和纯化方式

        A: 我们采用M2亲和纯化方法纯化蛋白。根据SDS-PAGE凝胶，蛋白的纯度估计在85%左右，有些蛋白在其主要产物带上方有微弱的高分子量条带，这是跨膜蛋白SDS-PAGE凝胶的正常特征。这些高分子量条带可能是由多聚体或PTM引起的。如果需要，我们可以进行WB试验来验证这些高分子量条带的真实性。

14. Q: 你们的Nanodisc蛋白在ELISA及WB实验应用中需要注意哪些问题？

        A: 由于纯化过程中抗flag M2抗体的轻/重链轻微脱落，我们无法使用抗小鼠二抗对Flag-tag nanodisc进行间接ELISA或WB实验。

1. Q: 待测抗体与 AME100002 按照质量比稀释混合，得到 Ab-AME100002 复合物，标记完的抗体是否可以保存，保存条件是什么?

        A: 我们没有进行具体的测试，建议您现配现用。

2. Q: AME100001试剂的原理以及如何算出内吞率?

       A: DiTag^TM pH-sensitive IgG labeling reagent利用pH敏感的荧光标记的Fc结合蛋白与来自不同物种的IgG抗体结合，从而形成荧光标记的抗体-试剂复合物。抗体内化后，周围pH变为酸性，显著增强抗体-试剂复合物的荧光信号。荧光强度可作为判断抗体内化活性的指标，通过测量荧光信号的强度，研究人员可以评估抗体内化进入细胞的效率。阳性率需要根据客户的实验设计去进行计算，阳性率计算的是内吞阳性细胞的百分比。

3. Q: DiTag^TMpH-sensitive IgG labeling reagent, MFI能达到多少？不同细胞信号值差多少？有些细胞会不会检测不到?

       A: MFI值与不同的细胞，不同的流式检测方式都有关系，不同细胞类型的MFI值可能不同，抗原低表达的细胞是有测不出来的风险。DIMA Biotechnology的实验数据表明，FITC的MFI值为3*10^4。

4. Q: AME100001和AME100002的区别?

       A: 主要区别在于它们对不同IgG抗体的亲和力，更多信息请参考下表。