兔DimAb重组单克隆抗体定制服务
缔码生物团队具备数十年高质量单克隆抗体开发经验。缔码生物独创的DimAb®重组单克隆抗体开发平台，不同于常规的杂交瘤单克隆抗体制备技术。我们可以直接从免疫动物的B细胞中获取它们的抗体基因序列。目前我们成功开发了多个客户项目且获得高度认可。
与其他动物相比，兔拥有独特的B细胞发育过程，并且比啮齿动物与人类的亲缘性更远。除此之外，兔B细胞具有双重亲和力成熟机制，包括基因转换和SHM（体细胞超突变）。同时，兔IgG的蛋白结构与鼠IgG不同，体现在其拥有一个亚型IgG，兔轻链上的特有的额外二硫键，以及CDR3的长度和序列差异很大等方面。这些不同之处能够让兔体内产生多种高亲和力的抗体。近年来兔单抗在各种不同的免疫检测方法中炙手可热，尤其是在免疫组化中的应用。截至目前FDA已批准了5个兔单克隆抗体用于IHC伴随诊断(下载) 。
在过去，由于兔骨髓瘤细胞系专利的原因，兔单抗开发技术在很多领域都受到了限制。而现在缔码生物创新性的DimAb®技术成功打破壁垒，取得重大的突破。我们能直接从阳性B细胞中克隆IgG，这一技术不仅大大缩短了研发的时间，也让我们能够直接获得IgG的基因序列信息，而无需担心杂交瘤细胞丢失。
| 比较项目 | 兔单克隆抗体 | 鼠单克隆抗体 |
| B细胞抗体谱系 | V(D)J排列；阑尾或其他肠相关淋巴样组织中继续发育，通过非常缓慢的基因转换来继续增加抗体谱的多样性和抗体库的规模 | V(D)J 排列 |
|---|---|---|
| 抗体成熟机制 | 基因转换+超突变 | 超突变 |
| CD1家族 | 五种 CD1 亚型，对脂质和糖脂等抗原有较强的免疫反应；识别多肽和小分子 | 一种CD1d；许多小分子化合物和多肽在小鼠体内并不能引起良好的免疫反应 |
| IgG类型 | 一种 IgG，有更多的二硫键，CDR 区和轻链的结构更复杂 | IgG1, IgG2a. IgG2b, IgG2c, IgG3 |
| 种属反应 | 对人和啮齿动物抗原有更强的反应 | 对啮齿动物抗原反应较弱 |
| 表位识别 | 抗体能识别抗原的多个表位，在翻译后修饰（如磷酸化、甲基化、乙酰化、泛素化）有优势 | 抗体识别有限的表位 |
| 亲和力 | Kd 值（平衡解离常数）通常可达到皮摩尔水平 (Kd = 10-12M) | Kd 值在纳摩尔范围内 (Kd = 10-9M) |
| 生产 | 重组表达抗体，批间稳定，可建立自动化制备流程 | 杂交瘤分泌抗体不稳定，容易造成抗体基因丢失 |
| 储存 | 直接获得抗体基因序列，抗体信息便于储存和传输 | 杂交瘤细胞保存成本极高，需要大量液氮和细胞储存设备 |
| 应用 | WB, ELISA, FC, IP, IHC, ICC(在IHC中优势明显) | WB, ELISA, FC, IP, 在IHC和ICC中优势不明显 |
| 比较项目 | 兔单克隆抗体 | 鼠单克隆抗体 |
| 亲和力 | +++++ | ++ |
|---|---|---|
| 病理应用趋势 | +++++ | +++ |
| 常用病理克隆 | +++ | ++++ |
| 抗体药开发平台成熟度 | ++ | +++++ |
| 常用IVD克隆 | ++ | ++++ |
应用于医疗诊断 研究数据表明，兔单抗在免疫组化中有明显优势。因此对于广大的病理学家，兔单抗成为他们最优的选择。FDA已经批准了11个用于诊断的兔单抗，包括用于PD-1，PD-L1，以及赫赛汀的伴随诊断抗体。
| Concomitant diagnostic reagents | Antibody drug | Cancer | Detection platform |
| PATHWAY ANTI-HER-2/NEU (4B5) | HERCEPTIN (trastuzumab) |
Breast cancer | IHC |
|---|---|---|---|
| VENTANA ALK (D5F3) CDx Assay | XALKORI (crizotinib) |
Non-small cell lung cancer | IHC |
| PD-L1 IHC 28-8 | OPDIVO (nivolumab) |
Melanoma Non-small cell lung cancer | IHC |
| VENTANA PD-L1 (SP142) Assay | TECENTRIQ (atezolizumab) |
Bladder cancer Non-small cell lung cancer | IHC |
| VENTANA PD-L1 (SP263) Assay | KEYTRUDA® (pembrolizumab) |
mNSCLC | IHC |
治疗性抗体药物的应用 2019年10月8日，FDA批准了首款兔源单克隆抗体药物Beovu®，用于治疗湿性年龄相关性黄斑变性（AMD）。Beovu®是一款靶向VEGF的人源化单链抗体可变区片段。这也是FDA批准的第83款抗体药物。兔重组单克隆抗体相比于其他抗体，具有更高的亲和力，这种特性不仅可以减少抗体的临床用量，还能减少由于大量抗体使用带来的副作用。
科学研究中的应用 凭借高特异性和高亲和力的优势，兔单克隆抗体已广泛应用于生命科学研究。目前，兔单克隆抗体已经在免疫印迹，免疫组化，流式细胞分析以及其他免疫学研究中得到了越来越多的应用。由于兔具有独特B细胞成熟系统，兔单抗能检测到小表位上的细微区别，例如蛋白质内翻译后修饰的氨基酸。
| 步骤 | 服务详情 | 可交付结果 | 预计生产周期（周） |
| 抗原制备 | 哺乳动物细胞表达制备抗原/客户提供抗原 | 7-10周 | |
|---|---|---|---|
| 动物免疫 | 针对同一抗原免疫两只动物（兔） | 抗血清滴度测试数据；免疫动物血清 | 5-8周 |
| B细胞分离纯化 | PBMC分离纯化；B细胞收集及冻存；靶标阳性B细胞富集和单B细胞扩增 | B细胞上清检测数据 | 2-3周 |
| DimAb® 抗体基因克隆，抗体表达和鉴定 | 利用分子克隆技术获得重链和轻链基因，构建真核表达载体；抗体小量生产和鉴定；挑取1-2个阳性克隆进行全长IgG测序和序列分析，并保存序列 | 1个克隆的测序报告 | 3-4周 |
| DimAb® 抗体生产和鉴定 | 抗体大量生产与纯化；抗体功能鉴定 | 抗体鉴定数据；1mg纯化抗体 | 3-4周 |
The whole DimAb® development procedure took around 3.5 months
(delivered 8 flow working rabbit DimAb®s to customer (Bioraid, a CAR-T company))
简体中文
English