胞外结构域(ECD)融合蛋白表达系统
目前几乎所有的治疗性抗体药物都以人膜蛋白或分泌蛋白分子的胞外结构域为靶点。表达和纯化具有天然活性结构的全长膜蛋白是非常困难或很难实现的。重组表达ECD-Fc融合蛋白是解决这一问题的常用方法。对于药物靶点，DIMA将构建ECD-Fc融合蛋白，并利用HEK293哺乳动物表达系统进行生产。这不仅将确保需表达的蛋白在哺乳动物细胞进行更接近天然蛋白的翻译后修饰，而且在标准缓冲液体系下很有可能获得具有可溶性的和正确折叠的蛋白。
基因合成
载体构建
蛋白表达与验证
大量表达与纯化
蛋白鉴定
1.具有接近天然蛋白翻译后修饰的哺乳动物表达系统
2.无血清培养体系：最大限度地减少宿主细胞污染
3.ECD-Fc融合蛋白具有更好的可溶性和稳定性
4.可实现蛋白定制和大规模生产
| 类型 | 大肠杆菌 | 酵母细胞 | 杆状病毒-昆虫细胞 | 哺乳动物细胞 | |
| 表达系统 | 原核 | 真核 | 真核 | 真核 | |
|---|---|---|---|---|---|
| 表达特点 | 经济 快速 无翻译后修饰 易形成包涵体 难表达大分子蛋白 |
经济 快速 有翻译后修饰 非人源糖基化 高甘露糖修饰 |
蛋白后修饰 高细胞密度 可溶蛋白 缺少部分糖基化 周期长 成本高 |
可溶蛋白 更低内毒素 更好的翻译后修饰 正确蛋白折叠 周期长 成本高 |
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| 翻译后修饰特点 | 羟基化 | 无 | 有 | 有 | 有 |
| 酰胺化 | 无 | 有 | 有 | 有 | |
| γ-羧基化 | 无 | 无 | 无 | 有 | |
| N-糖基化 | 无 | 高甘露糖 | 简单，无唾液酸 | 复杂 | |
| O-糖基化 | 无 | 有 | 有 | 有 | |
| 推荐表达 | 细菌类蛋白 抗原类蛋白 细胞因子 酶类 |
细胞因子 小分子量蛋白 酶类 |
分泌蛋白 跨膜蛋白胞外区 重组抗体 抗体片段 |
细胞质蛋白质 毒性蛋白 跨膜蛋白 分泌蛋白 激酶 |
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1.用于治疗性抗体药物开发的活性免疫原
2.活性配体和受体的鉴定
3.治疗性药物的临床前体外功能性实验
4.体外蛋白质功能性试验
5.基于细胞学的功能检测试验
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